實(shí)時(shí)熒光PCR試劑盒，對PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤，實(shí)時(shí)在線監(jiān)控反應(yīng)過程，結(jié)合相應(yīng)的軟件可以對產(chǎn)物進(jìn)行分析，計(jì)算待測樣品模板的初始濃度。熒光定量PCR技術(shù)是通過熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性探針，對PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤，實(shí)時(shí)監(jiān)控反應(yīng)過程。隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，反應(yīng)產(chǎn)物不斷累積，熒光信號強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個(gè)循環(huán)，收集一次熒光強(qiáng)度信號，這樣就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化，結(jié)合相應(yīng)的軟件對產(chǎn)物進(jìn)行分析，可以得到熒光擴(kuò)增曲線，計(jì)算待測樣品初始模版的量。實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)是一次由定性技術(shù)向定量技術(shù)的飛躍，運(yùn)用該項(xiàng)技術(shù)，可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行相對定量、定量和定性分析。

　　實(shí)時(shí)熒光PCR試劑盒概述：

　　1.是采用SYBRGreenI嵌合熒光法進(jìn)行RealTimePCR的試劑。產(chǎn)品中含有RealTimePCR反應(yīng)的適濃度SYBRGreenI，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，PCR反應(yīng)液的配制十分方便簡單。

　　2.Buffer經(jīng)過優(yōu)化改良，可以抑制非特異性反應(yīng)，能夠在更廣的范圍內(nèi)進(jìn)行準(zhǔn)確定量。

　　3.可以在寬廣的定量區(qū)域內(nèi)得到良好的標(biāo)準(zhǔn)曲線，對目的基因進(jìn)行準(zhǔn)確定量、檢測，重復(fù)性好，可信度高。

　　4.其中熒光定量MIX中已經(jīng)添加合適濃度的熒光定量ROX校正染料，實(shí)驗(yàn)時(shí)無需額外添加，直接可以進(jìn)行ROX校正實(shí)驗(yàn)。

　　實(shí)時(shí)熒光PCR試劑盒注意事項(xiàng)：

　　1.整個(gè)檢測過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作，各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器、耗材應(yīng)獨(dú)立使用，不能混用；實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作；三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。

　　2.為避免RNA降解，樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。

　　3.每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對照。

　　4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時(shí)離心。

　　5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在*次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)，并單獨(dú)存放。

　　6.為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。

　　7.儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置；不同批號試劑不能混用。

　　8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。

　　9.實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無害化處理后方可丟棄。