現(xiàn)貨狗促黃體素（LH）ELISA試劑盒實驗說明書

試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍： 96T
50ng/ml-000ng/ml

使用目的：
本狗促黃體素LH試劑盒用于測定狗血清、血漿及相關液體樣本中促黃體素（LH）含量。

實驗原理
狗促黃體素LH試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中狗促黃體素（LH）水平。用純化的狗促黃體素（LH）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入促黃體素（LH），再與HRP標記的促黃體素（LH）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的促黃體素（LH）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中狗促黃體素（LH）濃度。 

狗促黃體素LH試劑盒組成 
30倍濃縮洗滌液 20ml×瓶 7 終止液 6ml×瓶
2 酶標試劑 6ml×瓶 8 標準品（2000ng/ml） 0.5ml×瓶
3 酶標包被板 2孔×8條 9 標準品稀釋液 .5ml×瓶
4 樣品稀釋液 6ml×瓶 0 說明書 份
5 顯色劑A液 6ml×瓶 封板膜 2張 
6 顯色劑B液 6ml×/瓶 2 密封袋 個

標本要求 
．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟
. 標準品的稀釋：本狗促黃體素LH試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
000ng/ml 5號標準品 50μl的原倍標準品加入50μl標準品稀釋液
500ng/ml 4號標準品 50μl的5號標準品加入50μl標準品稀釋液
250ng/ml 3號標準品 50μl的4號標準品加入50μl標準品稀釋液
25ng/ml 2號標準品 50μl的3號標準品加入50μl標準品稀釋液
62.5ng/ml 號標準品 50μl的2號標準品加入50μl標準品稀釋液

2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品0μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。 
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色5分鐘.
0. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后5分鐘以內進行。

狗促黃體素LH操作程序總結：
.準備試劑，樣品和標準品
2.加入準備好的樣品和標準品，37℃反應30分鐘 
3.洗板5次，加入酶標試劑，37℃反應30分鐘
4.洗板5次，加入顯色液A、B，37℃反應0分鐘
5.加入終止液
6.5分鐘之內度OD值
7.計算

計算
以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。 

注意事項
．狗促黃體素LH試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡5-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數(shù)量多，使用排槍加樣。
4．請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
0.如與英文說明書有異，以英文說明書為準。

保存條件及有效期
．狗促黃體素LH試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月