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人去氫血栓烷B2(-DH-TXB2)試劑盒分析

更新時間:2014-12-22 點擊量:546

去氫血栓烷B2(-DH-TXB2)試劑盒分析

本試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍:96T
20pg/ml-480pg/ml 

使用目的:去氫血栓烷-DH-TXB2試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中去氫血栓烷B2(-DH-TXB2)含量。

實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中去氫血栓烷-DH-TXB2水平。用純化的去氫血栓烷B2(-DH-TXB2)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入去氫血栓烷B2(-DH-TXB2),再與HRP標記的去氫血栓烷B2(-DH-TXB2)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的去氫血栓烷B2(-DH-TXB2)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中去氫血栓烷B2(-DH-TXB2)濃度。

試劑盒組成

30倍濃縮洗滌液20ml×瓶

7

終止液6ml×瓶

2

酶標試劑6ml×瓶

8

標準品(960pg/ml)0.5ml×瓶

3

酶標包被板2孔×8條

9

標準品稀釋液.5ml×瓶

4

樣品稀釋液6ml×瓶

0

說明書

5

顯色劑A液6ml×瓶

封板膜2張 

6

顯色劑B液6ml×/瓶

2

密封袋

標本要求

.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融

2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

.標準品的稀釋:本去氫血栓烷-DH-TXB2試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

480pg/ml5號標準品50μl的原倍標準品加入50μl標準品稀釋液
240pg/ml4號標準品50μl的5號標準品加入50μl標準品稀釋液
20pg/ml3號標準品50μl的4號標準品加入50μl標準品稀釋液
60pg/ml2號標準品50μl的3號標準品加入50μl標準品稀釋液
30pg/ml號標準品50μl的2號標準品加入50μl標準品稀釋液

2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品0μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  

4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

7.溫育:操作同3。

8.洗滌:操作同5。

9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色5分鐘.

0.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后5分鐘以內進行。

計算
以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。

注意事項

去氫血栓烷-DH-TXB2試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡5-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,使用排槍加樣。

4.請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。

5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物請避光保存。

7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9.本試劑不同批號組分不得混用。

0.如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

保存條件及有效期

.試劑盒保存:;2-8℃。

2.有效期:6個月

聯系方式

郵箱:[email protected] 地址:上海市嘉定區澄瀏公路52號盛創企業
咨詢熱線

021-39921927

(周一至周日9:00-19:00) 在線咨詢
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