A.所需溶液和試劑

    X磷酸鹽緩沖液（PBS）：將8 g氯化鈉（NaCl），0.2 g 氯化鉀（KCl），.44 g （Na2HPO4），0.24 g 磷酸二氫鉀（KH2PO4）溶解在800 ml蒸餾水（dH2O）中。用鹽酸調節pH到7.4，定容至升。室溫保存。細胞

    （無甲醇的）

    孵育緩沖液：將0.5 g牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）溶解在00 ml的 X PBS中。保存在4°C。

B. 固定

    離心收集細胞，棄上清。
    將細胞重懸在0.5- ml PBS中。加入至終濃度為2-4%。
    37°C固定0分鐘。
    放在冰上降溫分鐘。
    做細胞外染色不需要細胞膜打孔時，繼續D步或將細胞保存在4°C含有0.%疊氮鈉的PBS中；做細胞內染色時，繼續C步給細胞膜打孔。

C.細胞膜打孔

    邊輕輕震蕩邊將冰冷的00%甲醇緩慢加入到預冷的細胞中，至終濃度為90%。或者也可以在細胞膜打孔前離心去除固定劑，然后將細胞沉淀重懸在90%甲醇PBS溶液中。
    在冰上放置30分鐘。
    進入染色步驟或是將細胞在90%甲醇PBS溶液中，-20°C保存。