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兔ELISA試劑盒的原理和操作步驟

更新時間:2021-04-21 點擊量:393
  兔ELISA試劑盒基本原理:
    .抗原或抗體能吸附到固相載體表面,并保持其免疫學活性;
  2.抗原或抗體可通過共價鍵與酶連接形成酶結合物,仍保持其免疫學和酶學活性;
  3.酶結合物與相應抗原或抗體結合后,可根據加入底物的顏色反應來判定是否有免疫反應的存在,而且顏色反應的深淺是與標本中相應抗原或抗體的量成正比例,因此,可以按底物顯色的程度顯示試驗結果。
  兔ELISA試劑盒操作步驟:
  .使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。
  2.根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液:稀釋后加入50ul于反應孔內。
  3.加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育小時。
  4.甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
  5.每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
  6.甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
  7.每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育0分鐘。避免光照。
  8.取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。
  9.在450nm波長處測定各孔的OD值。
建議使用的實驗方案:6號標準品以上的結果為非線性的,根據此標準曲線無法得到結果。 

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