熒光-PCR法是通過熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性的探針,對PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤,實(shí)時(shí)在線監(jiān)控反應(yīng)過程,結(jié)合相應(yīng)的軟件可以對產(chǎn)物進(jìn)行分析,計(jì)算待測樣品模板的初始濃度。
原理:
PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對引物的同時(shí)加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標(biāo)記一個報(bào)告熒光基團(tuán)和一個淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí),報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收;剛開始時(shí),探針結(jié)合在DNA任意一條單鏈上;PCR擴(kuò)增時(shí),Taq酶的5'端-3'端外切酶活性將探針酶切降解,使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴(kuò)增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實(shí)現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。
熒光-PCR法應(yīng)用領(lǐng)域:
1、臨床疾病診斷:各型肝炎、艾滋病、結(jié)核、性病等傳染病診斷和療效評價(jià);地中海貧血、血友病、性別發(fā)育異常、智力低下綜合癥、胎兒畸形等優(yōu)生優(yōu)育檢測;腫瘤標(biāo)志物及瘤基因檢測實(shí)現(xiàn)腫瘤病診斷;遺傳基因檢測實(shí)現(xiàn)遺傳病診斷。
2、動物疾病檢測:新城疫、口蹄疫、豬瘟、沙門菌、大腸埃希菌、胸膜肺炎放線桿菌、寄生蟲病等、炭疽芽孢桿菌。
3、食品安全:食源微生物、食品過敏源、轉(zhuǎn)基因、乳品企業(yè)阪崎腸桿菌等檢測。
4、科學(xué)研究:醫(yī)學(xué)、農(nóng)牧、生物相關(guān)分子生物學(xué)定量研究。
5、應(yīng)用行業(yè):各級各類醫(yī)療機(jī)構(gòu)、大學(xué)及研究所、CDC、檢驗(yàn)檢疫局、獸醫(yī)站、食品企業(yè)及乳品廠等。