豬ELISA試劑盒具有敏感性高,特異性強(qiáng),快速等特點,目前廣泛應(yīng)用于農(nóng)獸藥、真菌殘留檢測,該方法從加樣、洗板、顯色到讀數(shù)步驟繁多,其中任何一步控制不好都可能影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此,在實際測定操作中要注意以下幾點。
豬ELISA試劑盒的組成結(jié)構(gòu)
1、血清:操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱量的試管。收集血液后,000*g離心0分鐘將血紅細(xì)胞迅速小心的分離。
2、血漿:EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、細(xì)胞上清液:000×g離心0分鐘去除顆粒和聚合物。
4、組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。000×g離心0分鐘,取上清液。
5、保存:如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
豬ELISA試劑盒的操作方法
1、包被:在每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.ml,4℃過夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。
2、樣:加一定稀釋的待檢樣品0.ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育小時,然后洗滌。
3、加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體0.ml。
4、加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入底物溶液0.ml,37℃0~30分鐘。
5、終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入酸0.05ml。
6、結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無色或較淺,依據(jù)所呈顏色的深淺。