人原鈣黏素 ELISA試劑盒酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
使用說明書elisa法測定
規(guī)格：48T/96T
本試劑盒僅供體外研究使用!
ELISA法定量測定人尿液或其它相關(guān)生物液體中人原鈣黏素 ELISA試劑盒的含量。

標本的采集及保存
. 血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2. 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8°C 000 g離心5分鐘，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3. 細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本：000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
注：標本溶血會影響zui后檢測結(jié)果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。
標本的稀釋原則：
首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量，確定適當?shù)南♂尡稊?shù)。只有稀釋至標準曲線的范圍內(nèi)，檢測的結(jié)果才是準確的。稀釋的過程中，應(yīng)做好詳細的記錄。zui后計算濃度時，稀釋了“N”倍，標本的濃度應(yīng)再乘以“N”。
標準品的稀釋原則：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至ml，蓋好后靜置0分鐘以上，然后反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為50 U/L，做系列倍比稀釋后，分別稀釋50 U/L，25 U/L，2.5 U/L，6.25 U/L，3.2 U/L，.56 U/L，0.78 U/L，樣品稀釋液直接作為標準濃度0 U/L，臨用前5分鐘內(nèi)配制。
如配制25 U/L標準品：取0.5ml（不要少于0.5ml）50 U/L的上述標準品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
標記抗體的稀釋原則： 臨用前以標記抗體稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔00μl），實際配制時應(yīng)多配制0.-0.2ml。如0μl標記抗體加990μl標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內(nèi)配制。
辣根過氧化物酶標記親和素的稀釋原則：
臨用前以辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔00μl），實際配制時應(yīng)多配制0.-0.2ml。如0μl辣根過氧化物酶標記親和素加990μl辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內(nèi)配制。
操作步驟 實驗開始前，請?zhí)崆芭渲煤盟性噭噭┗驑悠废♂寱r，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應(yīng)該做標準曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。
. 加樣：分別設(shè)空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液00μl，余孔分別加標準品或待測樣品00μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)20分鐘。
為保證實驗結(jié)果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。
2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加標記抗體工作液 00μl（取μl標記抗體加99μl標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內(nèi)配制），37℃,60分鐘。
3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡-2分鐘，200μl/每孔，甩干。
4. 每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液（同標記抗體工作液） 00μl，37℃，60分鐘。
5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡-2分鐘，200μl/每孔，甩干。
6. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔顯色不明顯，即可終止）。
7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準確性，底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后5分鐘以內(nèi)進行檢測。

反復(fù)凍融。

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