產品名稱 | 小鼠肺血管平滑肌細胞 | 組織來源 | 肺組織 |
規格 | 5×10?Cells/T25培養瓶 | 包裝 | T25培養瓶 |
貨號 | GOY-01X0680 | 細胞形態 | 成纖維細胞樣 |
小鼠肺血管平滑肌分離自肺組織;肺是機體的呼吸器官,位于胸腔,左右各一,覆蓋于心之上。肺有分葉,左二右三,共五葉。肺經肺系(指氣管、支氣管等)與喉、鼻相連,故稱喉為肺之門戶,鼻為肺之外竅。肺血管平滑肌細胞原代分離培養3天后,可見細胞貼壁伸展,細胞形態大小不一,呈梭形、不規則形、三角形或扇形,核卵圓形、居中;2周后細胞匯合,多數細胞伸展呈長梭形,胞漿豐富,有分枝狀突起,細胞平行排列成單層或部分區域多層重疊生長,高低起伏;細胞密度低時,常交織成網狀;密度高時,則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快,4-6天即可匯合,并保持上述形態學特征和生長特點。肺血管平滑肌細胞主要功能:①細胞表面表達介質(ICAM-1和VCAM-1)參與血管壁炎癥反應;②是多數重要動脈疾病的靶細胞。肺血管平滑肌細胞與主要病生理變化:①平滑肌增生易致肺動脈高壓;②先天性肺動脈狹窄;③肺動脈栓塞。血管平滑肌細胞的加速生長潛能是血管疾病進展的關鍵因素,最新研究表明血管平滑肌細胞表達的ICAM-1和VCAM-1能促進血管壁的炎癥反應,并且與血管疾病的發展及穩定性有關。
方法簡介:
公司實驗室分離的小鼠肺血管平滑肌采用yi蛋白酶-膠原酶聯合消化法結合差速貼壁法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測:
公司實驗室分離的小鼠肺血管平滑肌經α-SMA免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
本公司所有產品僅供科學實驗,不做其他科學實驗外的使用!
培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳3代左右
消化液 0.25%yi蛋白酶
培養條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
準備工作
1. 實驗器材準備:準備無菌的培養皿、培養瓶、移液管、離心管、手術器械等,并進行高壓滅菌或其他合適的消毒處理。
2. 試劑準備:配制或購買合適的培養基、消化酶(如、膠原酶等)、胎牛血清、雙抗等試劑,確保其無菌且在有效期內。
3. 實驗動物或組織來源準備:根據實驗需求,選擇合適的動物并進行相應的麻醉或處死,獲取所需組織;或從已有的組織樣本庫中獲取組織。
取材與處理
1. 取材:在無菌條件下,迅速取出目標組織,盡量減少對組織的損傷,并去除多余的脂肪、結締組織等非目的組織。
2. 清洗:將取出的組織用預冷的無菌PBS沖洗數次,以去除血液和雜質。
3. 剪切:將組織剪成約1 - 2mm3的小塊,以便后續消化。
細胞分離
1. 消化:將剪碎的組織塊放入含有適量消化酶的離心管中,在37℃恒溫搖床或培養箱中消化一段時間。期間可輕輕搖晃離心管,使消化更均勻。
2. 終止消化:當組織塊大部分被消化成單細胞懸液或小細胞團時,加入含血清的培養基終止消化。
3. 過濾與離心:用細胞篩過濾細胞懸液,去除未消化的組織碎片,然后將濾液以適當的轉速離心,收集細胞沉淀。
細胞觀察與檢測
1. 日常觀察:每天用倒置顯微鏡觀察細胞的形態、生長狀態、密度等,記錄細胞的變化情況,如發現細胞污染或異常,及時采取相應措施。
2. 細胞計數與活力檢測:在需要時,可采用臺盼藍染色等方法對細胞進行計數和活力檢測,以了解細胞的生長情況和健康狀態。
一、取材與分離
1. 快速操作
- 組織取材后需立即處理,避免長時間暴露于室溫或非營養環境。
- 使用無菌 PBS 或生理鹽水沖洗組織,去除血液、雜質。
2. 消化酶選擇
- 根據組織類型選擇消化酶,避免過度消化導致細胞損傷。
- 消化時間需嚴格控制(通常 10-30 分鐘),可通過顯微鏡觀察細胞解離狀態。
二、培養條件優化
1. 培養基選擇
- 使用含血清或特定生長因子的培養基(如 DMEM、RPMI 1640 等),部分細胞需添加胰島素、EGF 等。
- 避免頻繁更換培養基品牌或批次,減少細胞適應壓力。
2. 貼壁與傳代
- 原代細胞貼壁能力較弱,可能需要包被培養皿(如膠原蛋白、多聚賴氨酸)。
- 傳代時密度建議控制在 70%-80%,過度匯合會導致接觸抑制和分化。
三、污染控制
1. 無菌操作
- 全程在超凈臺操作,使用一次性耗材,避免交叉污染。
- 培養基中可添加雙抗,但長期使用可能影響細胞活性。
2. 支原體檢測
- 定期檢測支原體污染(如 PCR 法),污染后需及時丟棄細胞。
四、狀態監控
1. 日常觀察
- 每天檢查細胞形態、密度及培養基顏色,及時更換培養基(通常每 2-3 天換液一次)。
- 異常形態(如細胞變圓、碎片增多)可能提示污染或營養不足。
2. 傳代與凍存
- 原代細胞分裂次數有限(一般 5-10 代),需及時凍存早期代次細胞。
- 凍存液建議使用 DMSO+血清(或專用凍存培養基),梯度降溫后液氮保存。
小鼠骨髓瘤細胞;FO | 小鼠淋巴瘤細胞;L5178YTK+/-clone(3.7.2C) |
小鼠乳腺癌細胞;4T1 | 凍存管,5.0ml,圓底,內旋密蓋,PP(聚丙烯)材質,滅菌,袋裝,硅膠墊圈 |
雞淋巴瘤細胞;DT40 | 凍存管 4.0ml 圓底 可立式 內旋密蓋 PP(聚丙烯)材質 滅菌 袋裝 硅膠墊圈 |
大鼠肝癌細胞;CBRH-7919[CBRH7919] | 凍存管 2.0ml 圓底 內旋密蓋 PP(聚丙烯)材質 滅菌 袋裝 硅膠墊圈 |
大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞;PC-12[PC12] | 凍存管,4.0ml,圓底,內旋密蓋,PP(聚丙烯)材質,滅菌,袋裝,硅膠墊圈 |
大鼠肝癌細胞;RH-35 | 凍存管,2.0ml,圓底,自立式,內旋密蓋,PP(聚丙烯)材質,滅菌,袋裝,硅膠墊圈 |
大鼠腦膠質瘤細胞;C6 | 凍存管,1.2ml錐心底,自立式,內旋密蓋,PP(聚丙烯)材質,滅菌,袋裝,硅膠墊圈 |
非洲綠猴腎細胞;VERO C1008 (E6) | 三角培養瓶,500ml,43mm頸瓶直徑,密封蓋,PC(聚碳酯)材質,單獨包裝 |
大鼠嗜堿性粒細胞性白血病細胞;RBL-2H3 | 凍存管蓋,內旋式,七彩色,未滅菌,袋裝 |
人淋巴細胞;1301 | 真空過濾器500ml 33mm直徑 0.45um孔徑CA(醋纖維)膜 滅菌 單獨包裝 |
斑馬魚尾鰭細胞;AB.9 | 真空過濾器500ml,45mm直徑,0.22um孔徑CA(醋纖維)膜,滅菌,單獨包裝 |
小鼠胚胎內層細胞團;R1 | 瓶口真空過濾器500ml 45mm直徑 0.45um孔徑CA(醋纖維)膜 滅菌 單獨包裝 |
小鼠胚胎內層細胞團;R1/E | 小鼠肺血管平滑肌細胞真空過濾系統 1000ml 0.2umNY(尼龍)膜 90mm直徑 滅菌 |
小鼠淋巴瘤細胞(NK靶細胞);YAC-1 | 真空過濾系統,1000ml,0.45umCA(醋纖維)膜,90mm直徑,滅菌,單個包裝 |
微量離心管 0.65ml 螺旋蓋 自然色 未滅菌 袋裝 | 真空過濾系統 1000ml 0.22umCA(醋纖維)膜 90mm直徑 滅菌(cf 430186) |